微阵列芯片应用流程

1）制备靶点

从生物标本中提取核苷酸并进行标记；

（2）杂交

让靶点与芯片上的cDNA或寡核苷酸序列进行孵育；

（3）获取数据

扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度

（4）数据分析

从大量数据中得出具有生物学意义的结论

微阵列芯片技术通过测定能够与探针杂交的mRNA的数量，反映表达此mRNA的基因的转录情况，芯片的构建首先要根据研究的需要选择基因及相应的探针，其次是从标本中提取mRNA，表面氨基化原理，并制备出靶点，然后将靶点加入芯片，进行孵育杂交、冲洗掉没有杂交的样品以及扫描等操作，表面氨基化方法，得到原始数据，再将这些数据进行标准化和统计分析后得到结论，构造适当的微阵列芯片是开展后续研究的基础。

目前，由于灵敏度所限，多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增，不过也有不少人试图绕过这一问题，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物特异性强，无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐； Lynx Therapeutics 公司引入的大规模并行固相法 (Massively parallel solid-phase cloning) ，台湾表面氨基化，可在一个样品中同时对数以万计的 DNA 片段进行，表面氨基化的意义，且无需单独处理和分离每个。

2.APES(3-氨丙基-乙氧基)

APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片，否则，组织片中易出现气泡。 APES的使用方法:用50倍稀释(APESl份、49份混合)，将洗净的玻片放人稀释好的APES中，停留20~30秒，取出稍停，再人纯或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位.并尽量减少气泡存在，以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱混合使用。

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